Antikörper- & Protein-Sequenzierung

Keine Hybridom Zelllinie? Kein Problem!

Manchmal ist die Sequenzierung der Hybridom-Zelllinie nicht möglich, da diese verloren gegangen ist oder aus einem anderen Grund nicht verfügbar ist.
Wenn noch eine ausreichende Menge des monoklonalen Antikörpers vorhanden ist, kann das Protein auch direkt sequenziert werden.

Im Gegensatz zur DNA oder RNA, die jeweils nur aus vier verschiedenen Bausteinen bestehen, sind Proteine komplexer aufgebaut. Sie bestehen aus mindestens 20 unterschiedlichen Aminosäuren, die darüber hinaus auch noch chemisch modifiziert sein können. Eine Sequenzierung von Proteinen ist daher schwieriger als bei Nucleinsäuren.
Mittlerweile hat sich die Massenspektrometrie als Methode der Wahl für die vollständige Antikörpersequenzierung durchgesetzt.
In fast allen Protokollen zur Antikörpersequenzierung wird der Antikörper zu Peptiden mit einer Länge von etwa 15 bis 20 Aminosäuren verdaut. Diese können dann im Massenspektrometer analysiert werden.
Im Idealfall kann jedes Peptid zur Erstelllung eines Fragmentspektrum genutzt werden. De novo Sequenzierung ist der Prozess der Ableitung einer bisher unbekannten Sequenz aus einem Fragmentspektrum oder einer Sammlung von Spektren. Bei der Antikörpersequenzierung muss jedes Fragmentspektrum interpretiert werden und zeigt einen Teil der Antikörpersequenz. Durch den Verdau des Antikörpers mit unterschiedlichen Enzymen ergeben sich unterschiedliche Spaltmuster. Hierdurch wird sichergestellt, dass jede Region des Antikörpers mehrere überlappende Peptide erzeugt. Bioinformatische Algorthitmen setzten die überlappenden Peptiden zur vollständigen Antikörpersequenz wieder zusammen.

Bei BIOZOL können Sie Ihren monoklonalen Antikörper schnell und professionell sequenzieren lassen.
Wir garantieren die Lieferung einer funktionellen Antikörpersequenz zusammen mit einem umfassenden Sequenzierungsbericht mit voller Sequenzabdeckung.

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