AbFlex® Rekombinante Antikörper

Hochspezifische, reproduzierbare Antikörper

Die AbFlex®-Antikörper unserer Partnerfirma Active Motif sind rekombinante Antikörper (rAbs), die unter Verwendung definierter DNA-Sequenzen hergestellt wurden, um hochspezifische, reproduzierbare Antikörper zu produzieren. Jeder AbFlex®-Antikörper enthält ein Sortase-Erkennungsmotiv (LPXTG), einen 6xHis-Tag und eine Biotinylierungs-Tag-Sequenz.

Vorteile der AbFlex® rekombinanten Antikörper (rAbs)

Flexible Labeling- und Aufreinigungsoptionen
Konsistente Leistung über Chargen hinweg
Hochspezifische und empfindliche Antikörper
Zuverlässige, langfristige Versorgung
Tierversuchsfreie Produktion

Jeder AbFlex®-Antikörper enthält ein Sortase-Erkennungsmotiv (LPXTG), mit dem Fluorophore, enzymatische Substrate (HRP, AP...usw.), Peptide, DNA, Wirkstoffe oder andere Markierungen gezielt und reproduzierbar an den Antikörper angefügt werden können, besonders einfach mit den Sortag-IT™ Markierungskits von Active Motif. Jeder Antikörper enthält außerdem einen 6xHis-Tag, der mit nickelbasierten Aufreinigungssystemen verwendet werden kann, sowie eine Biotinylierungs-Tag-Sequenz für die enzymatische Biotin-Konjugation mit der Biotin-Ligase BirA.

AbFlex®-Antikörper sind speziell am Ende der konstanten Region der schweren Kette markiert, um Interferenzen mit der Antigenerkennung und -funktionalität zu vermeiden. Dies ist wichtig, da so sichergestellt wird, dass der Markierungsprozess die Integrität des Antikörpers aufrechterhält und das Signal nicht durch nicht funktionale Antikörper beeinträchtigt wird. Im Gegensatz dazu werden bei den üblichen chemischen Markierungsverfahren die Markierungen nach dem Zufallsprinzip an den Antikörper angehängt. Die Zufälligkeit dieses Prozesses birgt ein hohes Potenzial, die Antigenbindungsstelle zu blockieren und den Antikörper unwirksam zu machen. Bei der chemischen Markierung können auch Markierungen auf die Fc-Region des Antikörpers aufgebracht werden, die die Wechselwirkungen mit Protein A behindern können.

Um eine optimale Leistung zu gewährleisten, wird jeder AbFlex®-Antikörper sorgfältig auf Spezifität und Empfindlichkeit geprüft. Es werden nur schwere und leichte Kettsequenzen ausgewählt, die hochspezifische Antikörper produzieren, wie in unserem beadbasierten Bindungstest nachgewiesen. Antikörper, die das AbFlex®-Direktmarkierungsverfahren verwenden, zeigen zudem in einer Vielzahl von Anwendungen eine höhere Sensitivität als ihre monoklonalen Stamm-Antikörper. Ein weiterer Vorteil der rekombinanten AbFlex®-Antikörper ist ihre tierfreie Produktion.

Antikörper-Labeling für ortsspezifische Konjugation an AbFlex® rAbs

Sortag-IT™ Markierungskits sind für die ortsspezifische Markierung der hochspezifischen rekombinanten AbFlex®-Antikörper (rAb) von Active Motif über die Sortase-Tag-Erkennungssequenz (LPXTG) konzipiert, die in die schweren Ketten jedes AbFlex-Antikörpers eingebaut ist. Konjugieren Sie Fluorophore, Enzyme (HRP, AP), Biotin, Peptide, DNA, Kohlenhydrate oder andere Markierungen direkt an das terminale Ende der schweren Kette, um sicherzustellen, dass die Antigenbindungsstelle für die Zielerkennung verfügbar bleibt.

Sortase A gehört zu einer Familie von Transpeptidasen, die in Gram-positiven Bakterien vorkommen und die Anheftung von Poly-Glycin (G)n-Markierungen an die Sortase-Erkennungssequenz katalysieren. Die Sortag-IT Labeling Kits verwenden die Sortase A5-Pentamutante von Active Motif aus Staphylococcus aureus, die deutlich aktiver ist als die Wildtyp-Sortase und eine schnellere und effizientere Markierungsreaktion ermöglicht. Geben Sie einfach Ihren AbFlex-Antikörper mit der Poly-Glycin-Markierung hinzu, fügen Sie Sortase A5 hinzu und inkubieren Sie etwa 1 Stunde lang. Die mitgelieferten Reinigungssäulen entfernen überschüssige Marker und die mitgelieferte Stopplösung inaktiviert das Enzym Sortase A5. Die markierten Antikörper sind für die nachgeschaltete Analyse bereit oder können bis zu 3 Monate bei 4 °C gelagert werden.